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產(chǎn)品簡稱

A highly efficient method of gene transfer into mammalian cells leveraging infection with retroviral vectors.

NACRES

NA.75

抗體應用

transfection: suitable

外形

每毫升無菌超純水溶解 10mg 聚乙烯。

應用

聚凝胺是一種陽離子聚合物，可以大大提高逆轉(zhuǎn)錄病毒或慢病毒感染哺乳動物細胞的效率。它起到中和病毒體與細胞表面之間電荷排斥的作用，從而提高感染效率。逆轉(zhuǎn)錄病毒感染的效率在某些細胞中顯著提高了 100 到 1,000 倍，這是因為在感染過程中加入了聚凝胺。含有 DMSO 的聚凝胺儲液還用于介導 DNA 轉(zhuǎn)移到多種細胞類型中，例如 CHO、雞胚成纖維細胞、NINH-3T3 和髓樣細胞。 方法：逆轉(zhuǎn)錄病毒感染 重組逆轉(zhuǎn)錄病毒儲液是通過將 5ml 生長培養(yǎng)基（含 5％ 血清）添加接近匯合的轉(zhuǎn)染的逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝細胞單層細胞的 100mm 平板中來制備的。24 小時后，去除培養(yǎng)基，并通過 0.45um 過濾器過濾。 將要感染該重組逆轉(zhuǎn)錄病毒儲液的細胞以每個 100mm 平板 500,000 個細胞的量接種在 10ml 完全培養(yǎng)基中。 24 小時后，去除細胞的生長培養(yǎng)基。用 2ml 的病毒上清液（或?qū)⒉《緝σ合♂屩?2ml）感染細胞，每毫升添加 5ug 至 10ug 的聚凝胺（最終濃度），在 37°C 下孵育細胞 3 到 6 小時。 加入 8 ml 完全培養(yǎng)基。感染三天后，將細胞按 1：5 的比例分進選擇培養(yǎng)基。 方法：轉(zhuǎn)染 將細胞鋪在完全生長培養(yǎng)基中，約有 50％ 匯合。 鋪板后 18 至 24 小時，立即使用以下方法制備 DNA-培養(yǎng)基-聚凝胺溶液： 注意：必須按照正確的順序添加每個組件。 1：完全生長培養(yǎng)基（60mm 平板，2ml； 100mm 平板，3ml），加熱至 37°C。 2：質(zhì)粒 DNA，10ng 至 10ug。輕輕混合。 3：聚凝胺的最終濃度為每毫升 5ug 至 10ug。輕輕混合 從平板中去除培養(yǎng)基，并將 DNA-培養(yǎng)基-聚凝胺溶液添加到細胞中。讓細胞在 37°C 下孵育 6 到 20 小時，前 6 個小時大約每 1.5 個小時輕輕搖動一次。 去除 DNA-培養(yǎng)基-聚凝胺溶液，并用 DMSO 儲液輕輕覆蓋細胞（在 1X HBSS 中的 15％ DMSO：專門培養(yǎng)基（貨號 S-051-D）每個 60 mm 平板 3 ml，每個 100 mm 平板 4 ml。手動搖動培養(yǎng)皿 10 秒鐘，使溶液均勻分布，然后將細胞置于 37°C 下溫育 4 分鐘。 立即去除 DMSO 儲液，并用完全生長培養(yǎng)基輕輕沖洗細胞兩次，每個 60 mm 培養(yǎng)皿每次洗滌用 5 ml，每個 100 mm 培養(yǎng)皿每次洗滌用 10 ml 將完全生長培養(yǎng)基添加到細胞中。 若要獲得穩(wěn)定的轉(zhuǎn)化子，則去除生長培養(yǎng)基，并將細胞按 1：5 比例分進選擇培養(yǎng)基。 若要瞬時表達，去除生長培養(yǎng)基并添加新鮮的生長培養(yǎng)基。24 至 72 小時后收獲細胞和/或培養(yǎng)基。 提供的試劑通過0.2μm膜過濾并用無菌H?O水化。

免責聲明

除非我們的產(chǎn)品目錄或產(chǎn)品附帶的其他公司文檔另有說明，否則我們的產(chǎn)品僅供研究使用，不得用于任何其他目的，包括但不限于未經(jīng)授權(quán)的商業(yè)用途、體外診斷用途、離體或體內(nèi)治療用途或任何類型的消費或應用于人類或動物。

外形

每毫升無菌超純水溶解 10mg 聚乙烯。

儲存及穩(wěn)定性

在 -20°C 可保存長達 2 年。